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實驗操作指導

實驗操作指導

免疫親和柱使用小貼士
免疫親和柱使用小貼士
1)上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高;?2)上柱樣品溶液中待測物含量勿超柱容量;?3)樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;?4)抗原抗體發生反應的最佳溫度是在25℃左右,實驗需要的環境溫度最好是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會對親和柱的回收率有一定的影響。親和柱在使用前如果在4-8℃環境下保存,也需要恢復至室溫在進行實驗;?5)親和柱不要在無水狀態下,瓊脂容易干燥萎縮,影響親和柱的質量;?6)親和柱保質期為1.5年,儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因為緩沖液凍結,會嚴重影響親和柱內的物理結構,對親和柱的質量影響很大。?7)樣品基質類型影響檢測準確性。通常針對不同類型的樣品產品說明書會有不同前處理方法。如:多次萃取,大量稀釋提取液后再將稀釋液上柱等。
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1)上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高;?2)上柱樣品溶液中待測物含量勿超柱容量;?3)樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;?4)抗原抗體發生反應的最佳溫度是在25℃左右,實驗需要的環境溫度最好是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會對親和柱的回收率有一定的影響。親和柱在使用前如果在4-8℃環境下保存,也需要恢復至室溫在進行實驗;?5)親和柱不要在無水狀態下,瓊脂容易干燥萎縮,影響親和柱的質量;?6)親和柱保質期為1.5年,儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因為緩沖液凍結,會嚴重影響親和柱內的物理結構,對親和柱的質量影響很大。?7)樣品基質類型影響檢測準確性。通常針對不同類型的樣品產品說明書會有不同前處理方法。如:多次萃取,大量稀釋提取液后再將稀釋液上柱等。
試劑盒使用小貼士
試劑盒使用小貼士
1)ELISA試劑盒中的試劑要與室溫平衡后才能使用。通常提前回溫1小時,試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。檢測前注意標準溶液與樣品溶液溫度的一致性。?2)加液一般用微量移液器,按規定的量加入板孔中,注意加樣時的一致性。?3)如果樣品量比較大,加酶標記物、抗體、底物溶液和終止液時可用多道移液器,使加液過程迅速完成。??4)ELISA反應溫度一般在18-30℃,24℃最佳。具體操作時可根據實際情況來控制。如溫度低時,可放入恒溫箱內孵育。如溫度過高,則需降低溫度或減短孵育時間。室溫孵育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。?5)洗板通常洗四次,次數太少可能洗不干凈,太多會造成吸光度值偏低,在洗板的過程之中,第一次和最后一次最重要,第一次拍板要盡可能把沒結合的物質洗掉,最后一次拍板要盡可能把多余的水拍干。?6)反應的溫度和時間是影響顯色的重要因素。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按說明書,力求準確。?7)酶標比色儀簡稱酶標儀,使用前先預熱儀器15-30分鐘,測讀結果更穩定。?8)不同批次產品不能混用,否則會影響檢測結果。確保使用的是試劑盒中原裝的標準溶液。?9)樣品吸光度值比最大標準溶液吸光度值更低時,樣品需要加大稀釋,并再次測定。?10)樣品基質類型影響檢測準確性。通常針對不同類型的樣品試劑盒說明書會有不同前處理方法。如:發酵類樣品待檢液調PH至6-7方可點板檢測,植物油脂類樣品待檢液需除脂后方可檢測。
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1)ELISA試劑盒中的試劑要與室溫平衡后才能使用。通常提前回溫1小時,試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。檢測前注意標準溶液與樣品溶液溫度的一致性。?2)加液一般用微量移液器,按規定的量加入板孔中,注意加樣時的一致性。?3)如果樣品量比較大,加酶標記物、抗體、底物溶液和終止液時可用多道移液器,使加液過程迅速完成。??4)ELISA反應溫度一般在18-30℃,24℃最佳。具體操作時可根據實際情況來控制。如溫度低時,可放入恒溫箱內孵育。如溫度過高,則需降低溫度或減短孵育時間。室溫孵育時,ELISA板只要平置于操作臺上即可。?5)洗板通常洗四次,次數太少可能洗不干凈,太多會造成吸光度值偏低,在洗板的過程之中,第一次和最后一次最重要,第一次拍板要盡可能把沒結合的物質洗掉,最后一次拍板要盡可能把多余的水拍干。?6)反應的溫度和時間是影響顯色的重要因素。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按說明書,力求準確。?7)酶標比色儀簡稱酶標儀,使用前先預熱儀器15-30分鐘,測讀結果更穩定。?8)不同批次產品不能混用,否則會影響檢測結果。確保使用的是試劑盒中原裝的標準溶液。?9)樣品吸光度值比最大標準溶液吸光度值更低時,樣品需要加大稀釋,并再次測定。?10)樣品基質類型影響檢測準確性。通常針對不同類型的樣品試劑盒說明書會有不同前處理方法。如:發酵類樣品待檢液調PH至6-7方可點板檢測,植物油脂類樣品待檢液需除脂后方可檢測。
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